女真為木犀科常綠灌木或小喬木,嫩枝有柔毛, 葉對生,革質(zhì),橢圓形?;ㄆ?~7月,果期8~12月。核果即女真子,橢圓形或長(cháng)圓形,長(cháng)6~12mm,幼時(shí)綠色,熟時(shí)藍黑色。原產(chǎn)于日本,現我國一些地區,如華東,華南,西南及華中各地已大面積引種,作為園林綠化佳木?,F代醫學(xué)表明,女真子具有補腰膝,壯筋骨,強陰腎,烏須發(fā),治神經(jīng)衰弱,風(fēng)熱赤嚴眼等作用,是一種兼具營(yíng)養和藥理作用值得開(kāi)發(fā)的植物資源(1)。黃酮類(lèi)化合物廣泛分布與植物界中,而且生理活性多種多樣,在花,葉,果等組織中,一般多以甙的形式存在。醫學(xué)研究表明,黃酮具有降低心肌耗氧量,使冠脈,腦血管流量增加,抗心律失常,軟化血管,降血糖,降血脂,抗氧化,消除機體內自由基抗衰老作用,增加機體免疫力的功能(6)。從銀杏(3) 等植物中提取黃酮類(lèi)化合物,國內外已經(jīng)有了很多報道,研究進(jìn)展也很快。女真子中提取黃酮卻鮮有報道。本文采用水浴方法對女真子中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝進(jìn)行了研究。
1 實(shí)驗部分
1.1 主要儀器、試劑藥品及材料
1.1.1 主要儀器
UV-1601型分光光度計及其配套設備(日產(chǎn))AEL-160電子天平(日產(chǎn))電熱恒溫水浴鍋及冷凝回流裝置(北京長(cháng)安科學(xué)儀器廠(chǎng))
SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠(chǎng))
1.1.2 材料與試劑
女真子:采自杭州,干燥粉碎后過(guò)40目篩;蘆丁標準品(德思特生物);
無(wú)水乙醇、丙酮、甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉,以上均為分析純
1.2 實(shí)驗方法
1.2.1 蘆丁標準應用液配制
準確稱(chēng)取干燥恒重的蘆丁標準品0.0752g,用30%乙醇溶解并定容250mL,搖勻得濃度為0.3008mg/ml標準應用液。
1.2.2 工作曲線(xiàn)回歸方程的建立
分別稱(chēng)取上述蘆丁標準溶液1.0mL, 2.0mL,4.0mL,6.0mL,8.0mL于5只25ml容量瓶中,用30%乙醇補充至12.5mL,加入0.7mL5%亞硝酸鈉搖勻,放置5min后加入0.7mL10%硝酸鋁, 6min加入5ml1mol/L氫氧化鈉, 混勻,用30%乙醇稀釋至刻度,10min后于510nm處比色測定,試劑為空白參比.蘆丁溶液C用最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得蘆丁溶液C與吸光度值A的關(guān)系曲線(xiàn)的回歸方程式:C=105.318A+0.403γ=0.9999
1.2.3 實(shí)驗步驟
1.2.3.1 正交設計
在參考文獻2、3的基礎上,通過(guò)預試,分別選定水浴的各個(gè)條件按正交表L9(34)安排四因素三水平
1.2.3.2 具體提取流程為使實(shí)驗具有可比性,應將抽濾過(guò)程的方法步驟統
一, 流程如下: 干燥2.5g→浸泡17hr→水浴→冷卻→抽濾→25ml浸提劑浸20min→抽濾→30ml浸提劑分三次洗濾→定容100ml
1.2.3.3 黃酮濃度測定
取浸提液0.5ml于25ml容量瓶,按上述1.2所用方法
測吸光度并計算黃酮含量。
2 結果與討論
2.1 水浴最佳條件及其分析四種因
素對提取結果影響大小依次為A>B>C>D,即浸提劑>浸提劑濃度>水浴時(shí)間>水浴溫度。浸提劑及其濃度的選擇是主要因素,黃酮甙類(lèi)以及極性稍大的甙元,如羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等,易溶于甲醇、乙醇等極性較大的有機溶劑。本實(shí)驗顯示的最佳浸提劑是甲醇,說(shuō)明女真子中可能含有較多的大極性甙元。濃度偏低的有機溶劑易于提取,這可能是由于女真子中有易溶于水的和易溶于醇的物質(zhì),易溶于水的部分主要是黃酮甙類(lèi)及花色甙:而溶于甲醇的主要是黃酮甙元(或黃酮醇)類(lèi)化合物,50%的甲醇水溶液對水溶性和醇溶性的黃酮化合物的提取都比較全面(2)。而水浴溫度等影響不大,其最佳組合為A1B1D1C2。由于B因素最好為55%甲醇溶液,是否濃度越低越好呢?為此作者以濃度梯度再做擴展實(shí)驗,結果發(fā)現50%甲醇溶液提取效果更佳。所以最終得出水浴最佳提取方法為以15倍原料重的50%甲醇溶液在65℃下浸提2小時(shí)。
小結
女真子中含有一定量的黃酮類(lèi)化合物,在本實(shí)驗所確定的最佳提取工藝條件下,即以15倍原料重的50%甲醇溶液宰65℃的水浴中浸提2小時(shí),提取的黃酮含量為107.5mg/g。由此可見(jiàn),女真子是一種很有發(fā)展前途的植物黃酮資源,具有很好的開(kāi)發(fā)前景,而女真子中黃酮提取最佳條件的研究為其更好地開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗依據。